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293細胞正確的培養(yǎng)步驟

更新時間:2022-07-26瀏覽:3177次

  293細胞被用于腺病毒載體的繁殖。利用病毒進化目標基因并將其轉(zhuǎn)移到細胞中是一種有效的方法。然而,由于病毒作為病原體的特性,它們也會帶來風險。因此,為了繁殖這種病毒載體,需要一種能夠表達缺失基因的細胞系。不僅具有生成人糖基化譜和建立調(diào)控記錄的能力,而且具有多種優(yōu)勢,是一種特別有吸引力的重組蛋白表達系統(tǒng)。
 
  293細胞培養(yǎng)步驟:
 
  一、復蘇細胞:
 
  將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中),培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
 
  二、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
 
  a)對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
 
  1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
 
  2.加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化。
 
  3.輕輕吹打細胞,*脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
 
  4.按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,將細胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
 
  b)對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
 
  方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
 
  方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。

 

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