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人支氣管成纖維細(xì)胞該如何培養(yǎng)?

更新時(shí)間:2022-12-06瀏覽:992次

  成纖維細(xì)胞(fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,細(xì)胞呈梭形或扁的星狀,具有突起。根據(jù)不同的功能活動(dòng)狀態(tài),將細(xì)胞分為成纖維細(xì)胞和纖維細(xì)胞二型:成纖維細(xì)胞乃是功能活動(dòng)旺盛的細(xì)胞,細(xì)胞和細(xì)胞核較大,輪廓清楚,核仁大而明顯,細(xì)胞質(zhì)弱嗜堿性,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng);纖維細(xì)胞(fibrocy te)功能活動(dòng)不活躍,細(xì)胞輪廓不明顯,核小著色深,核仁不明顯,細(xì)胞質(zhì)少。此二型細(xì)胞可互相轉(zhuǎn)化。
 
  人支氣管成纖維細(xì)胞培養(yǎng):
 
  可用酶消化法或組織塊法,其中組織塊法又因其操作簡(jiǎn)便、條件易于控制而應(yīng)用更為普遍。通常,以酶消化法獲得的成纖維細(xì)胞懸液在接種后5~10min即可見細(xì)胞以偽足初期附著,與 底物形成一些接觸點(diǎn);然后細(xì)胞逐漸呈放射狀伸展,胞體的中心部分亦隨之變扁平;大約在接種后30min,呈現(xiàn)成纖維細(xì)胞的形態(tài)。
 
  采用組織塊法則大約在接種后2~3天到1周左右,在接種的皮膚組織塊周圍長(zhǎng)出細(xì)胞。待細(xì)胞融合成片,鋪滿培養(yǎng)容器底壁大部分時(shí)即可進(jìn)行傳代。一般都采用 胰蛋白酶(trypsin),將成纖維細(xì)胞從底壁消化下來后分瓶作傳代培養(yǎng)。成纖維細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下能保持良好的分裂增殖能力。細(xì)胞分裂時(shí)變?yōu)榍蛐?;分裂后又平鋪在附著物的表面成為有突起的扁平?xì)胞。體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞,其生命期限與物種等因素有關(guān)。
 
  例如:人支氣管成纖維細(xì)胞約可培養(yǎng)50代;恒河猴皮膚成纖維細(xì)胞能傳代超過40代;雞胚成纖維細(xì)胞則只有少數(shù)能培養(yǎng)30代;而小鼠成纖維細(xì)胞多數(shù)只能生長(zhǎng)8代左右。另外,從老年個(gè)體取得的成纖維細(xì)胞的壽命要比取自年輕者短。由于在細(xì)胞傳代和進(jìn)行體外培養(yǎng)時(shí),細(xì)胞的生物學(xué)特性會(huì)逐漸發(fā)生一些不同于體內(nèi)的改變,故通常只將代視這正常細(xì)胞,可在此時(shí)將生長(zhǎng)旺盛的成纖維細(xì)胞凍存起來,以備將來復(fù)蘇使用,這在將培養(yǎng)的細(xì)胞由動(dòng)物實(shí)驗(yàn)向人體實(shí)驗(yàn)過渡的過程中必須給予足夠的重視。

 

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