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小鼠原代細(xì)胞分離實(shí)驗(yàn)步驟

更新時(shí)間:2021-07-16瀏覽:1398次

  小鼠原代細(xì)胞是從小鼠的特定組織中提取出來(lái)的,則可直接得到目的基因不表達(dá)的原代細(xì)胞模型,且與我們?cè)贙O小鼠上的研究具有更好的承接性,從而讓我們想要證實(shí)的實(shí)驗(yàn)?zāi)康母哂姓f(shuō)服性。KO小鼠的原代細(xì)胞還可用于細(xì)胞水平的藥物篩選、藥物評(píng)價(jià)等方面。原代細(xì)胞(Primary cells)是指來(lái)源活體組織,經(jīng)特定分離方法制備而成的初始細(xì)胞。原代細(xì)胞離體時(shí)間短且不經(jīng)過(guò)永生化過(guò)程,其生物學(xué)特性未發(fā)生很大變化,仍保持原有的遺傳特征,可更好地反映細(xì)胞在體內(nèi)的生長(zhǎng)狀態(tài),從而獲得與體內(nèi)生理功能更接近的數(shù)據(jù)。
  小鼠原代細(xì)胞分離實(shí)驗(yàn)步驟:
  1、小鼠麻醉
  根據(jù)體重計(jì)算相應(yīng)的麻醉劑量并腹腔注射(也可以用異氟烷進(jìn)行空氣麻醉)
  2、對(duì)*麻醉后的小鼠進(jìn)行解剖,打開(kāi)腹腔,找到小鼠下腔靜脈及門靜脈,使用滯留針插入下腔靜脈,將50-60ml的緩沖溶液一在10-20min內(nèi)緩慢注射進(jìn)入小鼠血液循環(huán)內(nèi),看到小鼠肝臟有明顯腫脹時(shí)剪開(kāi)門靜脈,完成后改用緩沖溶液二進(jìn)行沖洗。
  3、沖洗完成后,將小鼠肝臟剪下,轉(zhuǎn)移至DMEM高糖培養(yǎng)基,用DMEM培養(yǎng)基清洗2-3次后,使用滅菌鑷子將肝臟在培養(yǎng)基內(nèi)撕開(kāi),使原代肝細(xì)胞從肝臟內(nèi)流出。
  4、將分離得到的肝臟細(xì)胞過(guò)篩網(wǎng)篩選,過(guò)濾組織碎塊及其他雜質(zhì),并對(duì)細(xì)胞混懸液離心,按照一定的離心力得到初步的肝細(xì)胞沉淀,此時(shí)的肝細(xì)胞中混雜著肝臟實(shí)質(zhì)細(xì)胞和非實(shí)質(zhì)細(xì)胞,需要使用percoll離心液進(jìn)行梯度離心。
  5、梯度離心后的細(xì)胞即為原代肝臟實(shí)質(zhì)細(xì)胞,重懸后計(jì)數(shù)即可用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn),若對(duì)細(xì)胞純度存疑,也可以進(jìn)行流式測(cè)定。

 

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