細 胞 基 本 信 息

▲SK-LU-1細胞正常生長形態(tài)照片

--細 胞 基 本 信 息---

細胞名稱:  SK-LU-1(人低分化肺腺癌細胞)

細胞別稱:   SK-Lu-1; SK LU 1; SK-Lu1; SK-LU1; SKLU-1; SKLU1; SKLU01

細胞貨號:   SNL-229

生長特性:   貼壁

培養(yǎng)條件:   DMEM+10% FBS+1% P/S

培養(yǎng)環(huán)境:  空氣，95%；二氧化碳 (CO2)，5%

細胞簡介:  SK-LU-1細胞來源于一名64歲患有肺腺癌（III級）的白人女性。SK-LU-1細胞在免疫耐受大鼠中是致瘤的。SK-LU-1細胞支原體污染于1971年被發(fā)現(xiàn)并消除，可以用于3D細胞培養(yǎng)。

細 胞 凍 存 攻 略

凍存步驟:

1、先將細胞按傳代步驟消化、離心，至傳代步驟4，棄細胞上清，獲得細胞沉淀；

2、加入適量預先配好的程序性凍存液輕輕重懸細胞，并將細胞懸液轉(zhuǎn)移至做好標記的凍存管中；

3、將凍存管放入程序性凍存盒，放入-80℃冰箱過夜；

4、轉(zhuǎn)移細胞至液氮保存并登記細胞保存位置，液氮保存24h后建議復蘇一管檢測凍存細胞的活性，若活性合格即可長期保存，若低于80%建議重新凍存；

Tips：

◎1. 檢測凍存細胞活性結(jié)果未合格前，培養(yǎng)瓶內(nèi)細胞建議繼續(xù)培養(yǎng)直至確認凍存合格方可視需要丟棄；

◎2. 程序性凍存液需要配合程序性凍存盒使用，若使用非程序凍存液可以按產(chǎn)品說明書處理降溫過程；

◎3. T25培養(yǎng)瓶長滿通?？梢詢龃?-3管，10cm皿長滿可以凍存3-4管；

細 胞 復 蘇 攻 略

復蘇步驟:

1、將所需的培養(yǎng)基放在培養(yǎng)箱預熱30min后開始復蘇；

2、準備37度溫水，將細胞從液氮罐取中出，觀察管內(nèi)無液氮的情況下，捏住管蓋，將細胞凍存部分浸入溫水輕輕搖晃，融化至米粒大小冰塊，終止水浴；

3、將凍存管以離心力150g(約900rpm)左右離心1-2min，不同離心機具體轉(zhuǎn)速會有差異；

4、離心完成后，棄凍存液，用剛才預熱的培養(yǎng)基緩慢加入凍存管，并輕柔重懸細胞后接種至T25或者10cm皿中。

Tips：

◎1. 凍存管在液氮長期保存過程中難免滲入液氮，取出細胞時震動不要過大，水浴前一定要觀察管內(nèi)是否存在液氮，若有液氮建議靜置一會待液氮蒸發(fā)后再水??；

◎2. 水浴時可以使用一次性PE手套包住凍存管避免直接接觸水源，以降低管蓋縫隙滲入水導致污染的概率；

◎3. 水浴至剩米粒大小時及時終止水浴，避免過度水浴或水浴時間不足；

◎4. 建議水浴完成后直接在離心管內(nèi)離心細胞，避免再次轉(zhuǎn)移細胞；

◎5. 復蘇后的細胞比較脆弱，吹打和轉(zhuǎn)移細胞時盡量輕柔，復蘇24h后換液去除死亡細胞；

#常見問題及解決方案

一、細胞密度怎么計算的？

嚴格意義上，細胞密度需要收集細胞懸液計數(shù)細胞數(shù)量，但在實際培養(yǎng)過程中，并不需要為了精確控制細胞數(shù)量而消化細胞計數(shù)。因此，常用的細胞密度指細胞相對于最大生長密度的比值，貼壁細胞可以粗略的用細胞所占培養(yǎng)容器底面積百分比表示，即顯微鏡下觀察培養(yǎng)容器底部，有細胞的區(qū)域占總區(qū)域的百分比值，當然這種表達方式受限于單個細胞生長不同密度時所占面積不同導致并不嚴謹，但也是相對直觀、簡便的表現(xiàn)細胞狀態(tài)的一種方式；

二、培養(yǎng)過程中細胞碎片較多怎么處理？

1. 細胞內(nèi)的黑色顆粒是細胞外分泌泡及細胞器折光，這個屬于細胞自身特性，無法清除也無法改變，大部分細胞都會有這種現(xiàn)象，只是不同細胞顆粒多少有區(qū)別，細胞培養(yǎng)體系不適應、營養(yǎng)缺乏、滲透壓異常等均可能導致細胞內(nèi)顆粒增加，建議使用合適的培養(yǎng)條件。

2. 細胞外的黑色顆粒大部分是細胞碎片和細胞代謝產(chǎn)物，可以先吸走培養(yǎng)基后用PBS潤洗清除，再加新的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。潤洗不能清除的可以換液清洗后等細胞密度70-80%左右消化處理細胞，消化完成后加培養(yǎng)基終止消化，混勻細胞，收集細胞懸液900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。再加5ml PBS重懸細胞，再離心后，用培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次。

三、細胞具體消化時間是多久？

每個客戶用的胰酶活力及消化步驟、試劑都是不一樣的，不能規(guī)定消化時間，以實際消化效果和客戶經(jīng)驗為準。

文 獻 引 用

Title:        

USP5-Beclin 1 axis overrides p53-dependent senescence and drives Kras-induced tumorigenicity

Journal:   Nature Communications

Date:      2022/12/23

Product name：  SK-LU-1(人低分化肺腺癌細胞)

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