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hela細胞進行傳代培養(yǎng)的操作步驟

更新時間:2022-11-18瀏覽:1088次

  hela細胞通過關閉某些信號通路(包括PI3K和MKK4/MAPK信號通路),激活某些信號通路(包括cAMP、Ca~(2+)—CaM、PKC、Ras和P38/MAPK信號通路),激活或抑制不同的信號分子,使細胞產生具有針對性的細胞效應,包括誘導表達多種特異性蛋白(酶、細胞骨架蛋白、細胞因子等)、改變代謝途徑、減弱某些代謝、加強另一些代謝以及提高胞內運輸能力等,使自己可以適應痢疾桿菌的侵襲而生存下去。
 
  hela細胞傳代培養(yǎng)的操作步驟:
 
  1.觀察培養(yǎng)基是否正常,細胞狀態(tài)如何,細胞密度如何,決定是否傳代。觀察時擰緊蓋子。
 
  2.加熱PBS、versene、培養(yǎng)基,(提前做好)瓶子不要倒著放,不要讓液體接觸到瓶塞。
 
  3.打開超凈臺(先開風機,后開照明),用75%乙醇清潔臺面,點燃酒精燈。不要把廢液缸拿出去倒,如果廢液太多,可以用其他容器先裝廢液。取小離心管一個,置于架子上。
 
  4.取尖吸管、吸量管各一支,放置在專用的架上。放置的方式,注意吸管、吸量管前端都不要與架子接觸。
 
  5.取待傳代的細胞。打開versene,用酒精燈外焰燒。燒吸管時距離酒精燈心遠些,不要把渣滓?guī)нM去。把試劑拿入臺子的時候,盡量平穩(wěn),不要讓試劑碰到瓶口。
 
  6.用吸量管吸取舊的培養(yǎng)基,置離心管中,吸量管加入versene,然后將versene瓶收起來。(加versene主要是為了將舊培養(yǎng)基洗去)。在離心管中間部分將液體加入。吸液體和加液體時都不要對著細胞。
 
  7.打開胰酶,然后將versene棄掉。換新管,用尖吸管吸取適量胰酶加入。加胰酶后,盡快放平,使細胞消化時間一致。
 
  8.將細胞放入37度孵箱。放孵箱2min,收胰酶,打開PBS.之后拿出來鏡下隨時觀察。使用二次消化法,去除容器中殘余的細胞。別忘了用舊培養(yǎng)基中和。

 

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