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如何繪制細(xì)胞生長曲線?

更新時間:2022-07-08瀏覽:2327次

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1.實(shí)驗(yàn)原理




典型的生長曲線即可分為潛伏期、指數(shù)生長期、平頂期及退化衰老四個部分,其中的三個不同生長時期(潛伏期、指數(shù)生長期和平頂期)是每個細(xì)胞系所共有的特征。通過測定生長曲線,不僅可以了解培養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)特性的基本參數(shù)、測定細(xì)胞絕對生長數(shù)、判斷細(xì)胞活力,而且也可用于測定藥物等外來因素對細(xì)胞生長的影響。本實(shí)驗(yàn)采用計(jì)數(shù)法測定細(xì)胞生長曲線,通過連續(xù)對細(xì)胞計(jì)數(shù)(通常為10天,一般應(yīng)每次計(jì)數(shù)3孔細(xì)胞取平均值),然后以存活細(xì)胞數(shù)對培養(yǎng)時間作圖,即得該種細(xì)胞的生長曲線。



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2.實(shí)驗(yàn)材料


①小鼠胚胎成纖維細(xì)胞或雞胚成纖維細(xì)胞,DMEM*培養(yǎng)基。

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3.操作步驟


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① 細(xì)胞接種濃度不能過多也不能過少,在合適的濃度下細(xì)胞在7~10天內(nèi)能長滿而不發(fā)生生長抑制;細(xì)胞數(shù)量太少,細(xì)胞適應(yīng)期太長;數(shù)量太多,細(xì)胞將很快進(jìn)入增值穩(wěn)定期,在一段時間內(nèi)需進(jìn)行傳代,曲線不能準(zhǔn)確反映細(xì)胞生長情況。同種細(xì)胞的生長曲線先后測定要采用同一接種密度,這樣才能做縱向比較;不同的細(xì)胞也要接種細(xì)胞數(shù)相同,才能進(jìn)行比較。


② 細(xì)胞生長曲線是觀察細(xì)胞生長基本規(guī)律的重要方法。只有具備自身穩(wěn)定性生長特性的細(xì)胞才適合在觀察細(xì)胞生長變化的實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用。因而在細(xì)胞系細(xì)胞和非建系細(xì)胞生長特性觀察中,生長曲線的測定是最為基本的指標(biāo)。


③ 細(xì)胞生長曲線雖然最為常用,但有時其反映數(shù)值不夠精確,有20% ~ 30%的誤差,需結(jié)合其他指標(biāo)進(jìn)行分析。在生長曲線上細(xì)胞數(shù)量增加1倍時間稱為細(xì)胞倍增時間,可以從曲線上換算出。細(xì)胞倍增的時間區(qū)間即為細(xì)胞對數(shù)生長期,細(xì)胞傳代、冷凍等實(shí)驗(yàn)多應(yīng)在此區(qū)間進(jìn)行。


④ 細(xì)胞在不同培養(yǎng)液中的細(xì)胞生長曲線和細(xì)胞倍增時間可以直接反映細(xì)胞在該種培養(yǎng)液內(nèi)的增殖速度,是對培養(yǎng)液進(jìn)行選擇的主要依據(jù)。通過個同培養(yǎng)液內(nèi)細(xì)胞生長曲線的差異,篩選出對成纖維細(xì)胞和上皮細(xì)胞適合的培養(yǎng)液。


⑤通過對細(xì)胞生長曲線的繪制,可比較不同的培養(yǎng)液對細(xì)胞生長曲線變化的影響。在條件允許的情況下,分析培養(yǎng)液中添加不同的生物活性物質(zhì)(如生長因子、激素等)對細(xì)胞生長的影響,從而篩選出合適的細(xì)胞培養(yǎng)液。


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產(chǎn) 品 推 薦


【SNL-025】NIH/3T3(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞)

【SNL-006】UMNSAH/DF-1(雞胚成纖維細(xì)胞)

【SNS-002】特級胎牛血清



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武漢尚恩生物技術(shù)有限公司坐落于武漢東湖區(qū)光谷生物城,專注于細(xì)胞及系列產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和服務(wù),公司建有標(biāo)準(zhǔn)化GMP實(shí)驗(yàn)室、動物房,已整體通過ISO 9001:2015質(zhì)量管理體系認(rèn)證,獲得企業(yè)、3551人才、瞪羚企業(yè)、科技小巨人等多項(xiàng)榮譽(yù)?! ?/p>


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