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染色凋亡試劑盒使用過(guò)程

更新時(shí)間:2021-05-06瀏覽:772次

  染色凋亡試劑盒貼壁細(xì)胞:
  A.取潔凈蓋玻片在70%乙醇中浸泡5分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間,無(wú)菌超凈臺(tái)內(nèi)吹干或用無(wú)菌的PBS或0.9%NaCl等溶液洗滌三遍,再用細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌一遍。將蓋玻片置于六孔板內(nèi),種入細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)夜,使約為50%-80%滿。
  B.刺激細(xì)胞發(fā)生凋亡后,吸盡培養(yǎng)液,加入0.5ml固定液,固定10分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間(可4℃過(guò)夜)。
  C.去固定液,用PBS或0.9%NaCl洗兩遍,每次3分鐘,吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床,或手動(dòng)晃動(dòng)。
  D.加入0.5ml Hoechst33258染色液,染色5分鐘。也宜用搖床,或手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。
  E.去染色液,用PBS或0.9%NaC1洗兩遍,每次3分鐘,吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床,或手動(dòng)晃動(dòng)。
  F.滴一滴抗熒光淬滅封片液于載玻片上,蓋上貼有細(xì)胞的蓋玻片,讓細(xì)胞接觸封片液,盡量避免氣泡。
  G.熒光顯微鏡可檢測(cè)到呈藍(lán)色的細(xì)胞核。激發(fā)波長(zhǎng)350nm左右,發(fā)射波長(zhǎng)460mm左右。
  染色凋亡試劑盒懸浮細(xì)胞:
  A.離心收集細(xì)胞樣品于1.5ml離心管內(nèi),加入0.5ml固定液,緩緩懸起細(xì)胞,固定10分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間(可4℃過(guò)夜)。
  B.離心去固定液,用PBS或0.9%NaCl洗兩遍,每次3分鐘。洗滌期間手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。
  C.離心后吸去大部分液體保留約50ul液體,再緩緩懸起細(xì)胞,滴加至載玻片上,盡量使細(xì)胞分布均勻。
  D.稍晾干,使細(xì)胞貼在載玻片上不易隨液體流動(dòng)。
  E.均勻滴上0.5ml Hoechst33258染色液,染色5分鐘。用吸水紙從邊緣吸去液體,微晾干。
  F.去染色液,用PBS或0.9%NaCl洗兩遍,每次3分鐘,吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床,或手動(dòng)晃動(dòng)。
  G滴一滴抗熒光淬滅封片液于載玻片上,蓋上一潔凈的蓋玻片,盡量避免氣泡。
  H.熒光顯微鏡可檢測(cè)到呈藍(lán)色的細(xì)胞核。激發(fā)波長(zhǎng)350nm左右,發(fā)射波長(zhǎng)460mm左右。

 

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